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Elisa實(shí)驗(yàn):ELISA樣本制備及注意事項(xiàng)

更新時間:2025-08-04    點(diǎn)擊次數(shù):93

  

  以下是本生對ELISA樣本制備的關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng),綜合實(shí)驗(yàn)規(guī)范與常見問題:

  一、樣本類型處理要點(diǎn)?

  血清制備?

  采集后室溫靜置1小時(凝血),4℃ 2500rpm離心10分鐘取上清

  避免溶血(血紅素干擾HRP顯色)和細(xì)菌污染(內(nèi)源性酶致假陽性)

  血漿處理?

  使用EDTA抗凝管采集,30分鐘內(nèi)4℃離心分離

  肝素抗凝劑可能干擾檢測,需參照試劑盒要求選擇

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?

  1500rpm離心10分鐘去除細(xì)胞碎片,分裝后-80℃保存

  尿液/腦脊液?

  10000×g離心2分鐘,去除沉淀物后檢測

  二、保存與凍存規(guī)范?

  樣本類型? ?短期保存? ?長期保存? ?禁忌?

  血清/血漿 2-8℃ 48小時 -80℃(6個月) 反復(fù)凍融>3次

  細(xì)胞上清 4℃ 24小時 -80℃(分裝) 室溫放置>30分鐘

  三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?

  防污染措施?

  使用無菌離心管,操作全程在冰上進(jìn)行(除凝血步驟)

  細(xì)菌污染樣本需離心后取上清重新檢測

  離心參數(shù)控制?

  血清/血漿:2500-3000rpm,10分鐘

  細(xì)胞裂解物:12000-13000rpm,5-10分鐘

  特殊樣本處理?

  高脂血樣本需超速離心(10000×g 15分鐘)

  組織樣本需液氮速凍后研磨,避免蛋白降解

  四、常見問題解決方案?

  假陽性高?:檢查溶血/脂血情況,更換抗凝劑類型

  重復(fù)性差?:確保分裝凍存,避免凍融循環(huán)

  濃度異常?:預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù)(建議1:5-1:10)

  通過規(guī)范操作可顯著提升檢測準(zhǔn)確性。

  注:以上資料僅供參考,如需具體品牌試劑盒的完整說明,可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。

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